江西多乐彩出号|江西多乐彩实时数据

技術文章

顯微數碼互動教學系統分享-冰凍切片的制作及注意事項

2017/02/04

操作方法及步驟:

取材,未能固定的組織取材,不能太大太厚,厚者冰凍費時,大者難以切完整,最好為24×24×2mm

取出組織支承器,放平擺好組織,周邊滴上包埋劑,速放于冷凍臺上,冰凍。小組織的應先取一支承器,滴上包埋劑讓其冷凍,形成一個小臺后,再放上細小組織,滴上包埋劑。

將冷凍好的組織塊,夾緊于切片機持承器上,啟動粗進退鍵,轉動旋鈕,將組織修平。

調好欲切的厚度,根據不同的組織而定,原則上是細胞密集的薄切,纖維多細胞稀的可稍為厚切,一般在510um間。

調好防卷板。制作冰凍切片,關鍵在于防卷板的調節上,這就要求操作者要細心,準確地將其調較好,調校至適當的位置。切片時,切出的切片能在第一時間順利地通過刀防卷板間的通道,平整地躺在持刀器的鐵板上。這時便可掀起防卷板,取一載玻片,將其附貼上即可。

應視不同的組織選擇不同的冷凍度。冷凍箱中冷凍度的高低,主要根據不同的組織而定,不能一概而論。如:切未經固定的腦組織,肝組織和淋巴結時,冷凍箱中的溫度不能調太低,在-10- -15左右,切甲狀腺、脾、腎、肌肉等組織時,可調在-1520左右,切帶脂肪的組織時,應調至-25左右,切含大量的脂肪時,應調至-30

冰凍切片時的注意事項:

防卷板及切片刀和持刀架上的板塊應保持干凈,需經常用毛筆挑除切片殘余和用柔軟的紙張擦。有時需要每切完一張切片后就用紙擦一次。因為這個地方是切片通過和附貼的地方,如果有殘余的包埋劑粘于刀或板上,將會破壞甚至撕裂切片,便切片不能完整切出。

多例多塊組織同時需做冰凍且片時,可各自放于不同的支承器上,于冷凍臺上凍起來,然后依據不同的編號,依序切片,這樣做既不費時也不會亂。

放置組織冰凍前,應視組織的形狀及走勢來放置,所謂砍柴看柴勢,切片也是如此,如果胡亂放置,就不能收到很好的效果。

組織塊不須經各種固定液固定,尤其是含水的固定液,在未達到固定前,更不能使用。臨床快速冰凍切片,不須要預先固定,一是為了爭取時間,二是固定了的組織,反而增加了切片的難度。如果使用未完全固定的組織做冰凍切片,就會出現冰晶。這是因為含水的固定液在組織未經固定前,其中的水份也可滲入到組織中去,當冰凍發生時,這些水份就存留于組織中,形成了冰晶。

當切片時,如果發現冰凍過度時,可將冰凍的組織連同支承器取出來,在室溫停留片刻,再行切片,或者用口中哈氣,或者用大拇指按壓組織塊,以此來軟化組織,再行切片。另者,調高冰凍點。

用于附貼切片的載玻片,不能存放于冷凍處,于室溫存放即可。因為當附貼切片時,從室溫中取出的載玻片與冷凍箱中的切片有一種溫度差,當溫度較高的載玻片附貼上溫度較低的切片時,由于兩種物質間溫度的差別,當它們碰撞在一起時,分子彼此間發生轉移而產生了一種吸附力,使切片與載玻片牢固地附貼在一起。如果使用冷藏的載玻片來附貼切片,由于溫度相同,沒有發生上述的現象。

江西多乐彩出号